TEV-протеаза

TEV протеаза – высокоспецифичная цистеиновая протеаза вируса гравировки табака (Tobacco Etch Virus). Фермент активен в широком диапазоне рН (от 4 до 8,5) и температуры (от 4 ˚С до 34˚С). TEV протеаза опознаёт и расщепляет линейный эпитоп, состоящий из семи аминокислот. Преимущественный сиквенс для протеолиза ENLYFQ↓S(G), где ↓ обозначает расщепляемую пептидную связь.

Данный продукт представляет собой генетически модифицированную рекомбинантную TEV протеазу, массой 28 кДа, содержащую на N-конце последовательность из шести гистидинов, позволяющую удалить фермент из реакционной смеси с помощью никель-хелатной хроматографии. В кодирующую последовательность были внесены три мутации: S219V для увеличения стабильности белка, и две (L56V и S135G) для увеличения растворимости.

Фермент был получен из штамма-продуцента E. сoli, аффинно очищен (чистота не менее 95 %) и переведен в буфер для хранения: 100 мМ Tris pH 8,0; 100 mM NaCl; 0,5 mM EDTA, 5 mM DTT, 50 % glycerol.